一般制备上比较少用梯度做的等都洗脱不下来么而且得看看您样品的性质和流动相上样量机器都有关系的如果你是半制备还可以如果是20×250以上的柱子最好是别用梯度我们可以研究研究qq382677067

HPLC分析一物质，如何消除梯度峰？

如果是紫外检测器，是无法完全消除的，信号的产生不仅仅是吸收，还有反射等，梯度洗脱时流动相的变化肯定会引起响应的变化。如果用ELSD就没有。所谓的梯度峰，是在进行空白梯度是能够重现的色谱曲线变化，如果不能重复，则有两种可能：1.有杂质洗脱出来2.色谱系统不一致（在进行梯度洗脱时，完全一致的条件，第1针和后续的进样会有差异——梯度开始时流动相的洗脱能力弱，会有杂质的富集）赞同chromsep的看法，可以用空白梯度来扣除；但如果目标峰在洗脱曲线变化明显的位置出峰，建议调整梯度，使两者错开。

液相色谱中怎么在软件中编辑洗脱梯度：

首先，前提是你必须要有双泵或者四元泵，才能梯度洗脱。其次，不管是哪种仪器都是在泵控制里面去设置。

请你帮我优化HPLC的色谱条件

首先：在你当前色谱条件下，想提高分离度，可以从以下几方面入手1.1>调高离子强度，降低缓冲液PH值。例如将磷酸的用量提高。假如你现在流动相PH至为4.0，则通过调高磷酸用量将PH调至3.5。2010版药典要求加1.44g和0.68ml，你可以试试加1.50g和0.8ml。（这个过程要注意缓冲液的PH值，不能低于色谱柱下限）1.2>提高缓冲液的比例，例如将500:500:60改成600:500:601.3>更换高效色谱柱永远是最快最简单的办法。1.4>如果你不怕麻烦的话，可以自己摸索以下梯度洗脱，这个太麻烦。第二：你可以用USP35或EP7.0的色谱条件试试。第三：中国药典2010版中明确要求十二烷基硫酸钠的加入量是1.44g，你为何要改为1.11g？

色谱仪怎么用梯度程序啊

你所说的梯度程序在色谱仪中是否是程序条件下的检测了如果是的话应该是这样操作的了每一种物质的检测条件是不一样的一般的分为3个条件柱箱温度汽化室温度检测器温度一般的程序检测就是柱箱温度的改变。比如柱箱120℃~220℃条件是（120℃保温5分钟以10℃/min的速率升温到220℃并保温20min）汽化室220检测器200该条件的检测是首先设置温度柱箱120℃汽化室220检测器200然后进行编程按编程出现程序第一步好像显示的是（FO--0）的了记得显示0就是第一步输入5按编程第二部输入10按编程第三部输入220按编程第四部输入20就可以了记得进完样之后要记得按启动否侧不能进行程序检测我使用的就是这样的希望可以帮到你

如何提高色谱仪的检出限

检出限提高的话可以采用高灵敏度的检测器，不同检测器提高灵敏度的方法不同。色谱仪的检测器如：ECD可以通过提高电信号，即提高电流。FID可以通过调整火焰的高度，燃烧的氢气空气比例等

高效液相色谱法中制备色谱的梯度怎么设置?或者是这方面的资料也行,谢谢~~!!!!

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高效液相色谱的原理及分析方法

分析色谱图手动进样步骤配置好流动相，将滤嘴洗头放入流动相页面内，打开泵和检测器，快跑排除气泡，设置既定流速，稳定一段时间，让基线跑平，用液相针吸取称量融配脱气后的对照（含量已标定），打开定量环将液相针里的液体匀速注入定量环中，拔出针头好立刻关闭六通阀，一般随六通阀关闭电脑自动采样，等主峰跑完整后记录其峰面积，一般跑两个对照，每个对照跑两针，共四针。然后开始注称好溶配脱气后的样，以对照主峰的保留时间来判断样品中目标峰的位置，外标法以峰面积计算供试品中某物质的含量。X=[S样*K/m样（1-水分）]*对照品含量%*100X:供试品的含量(%);S样:供试品的主峰面积;K:单位面积对照品的质量m样(1-水分):称取供试品折干后的质量(mg);X对:对照品的含量(%);（我是用仪器的，不是做广告的，推荐你去海川论坛的化工分析版块儿上去深入的学习，知识是积累起来的，不是一个问题一个答案这么简单，海川里介绍还算比较丰富的，仪器信息网针对仪器本身有一些。）仪器自身的原理请看参考资料URL（随手找的）

什么是高效液相色谱及其操作方法？

高效液相色谱（high performance liquid chromatography, HPLC）也叫高压液相色谱（high pressure liquid chromatography）、高速液相色谱（high speed liquid chromatography）、高分离度液相色谱（high resolution liquid chromatography）等。是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱。又因分析速度快而称为高速液相色谱。 高效液相色谱是目前应用最多的色谱分析方法，高效液相色谱系统由流动相储液体瓶、输液泵、进样器、色谱柱、检测器和记录器组成，其整体组成类似于气相色谱，但是针对其流动相为液体的特点作出很多调整。HPLC的输液泵要求输液量恒定平稳；进样系统要求进样便利切换严密；由于液体流动相粘度远远高于气体，为了减低柱压高效液相色谱的色谱柱一般比较粗，长度也远小于气相色谱柱。HPLC应用非常广泛，几乎遍及定量定性分析的各个领域。 使用高效液相色谱时，液体待检测物被注入色谱柱，通过压力在固定相中移动，由于被测物种不同物质与固定相的相互作用不同，不同的物质顺序离开色谱柱，通过检测器得到不同的峰信号，最后通过分析比对这些信号来判断待侧物所含有的物质。高效液相色谱作为一种重要的分析方法，广泛的应用于化学和生化分析中。高效液相色谱从原理上与经典的液相色谱没有本质的差别，它的特点是采用了高压输液泵、高灵敏度检测器和高效微粒固定相，适于分析高沸点不易挥发、分子量大、不同极性的有机化合物。操作方法：http://wenku.baidu.com/view/066eb8fc700abb68a982fb68.html

请问高效液相色谱仪的使用方法是什么？急用。拜托

看你用的哪种型号，一般将流动相配好后，用微孔滤膜超滤，再用脱气装置脱去流动相中溶解的小气泡，然后换上流动相，开机，按你的条件进行设置就行了。

高效液相色谱仪的最基本组件和梯度洗脱的含义,种类是什么?

一、参考网络百科：http://baike.baidu.com/view/971281.htm 　在所有色谱技术中，液相色谱法（liquid chromatography，LC）是最早（1903年）发明的，但其初期发展比较慢，在液相色谱普及之前，纸色谱法、气相色谱法和薄层色谱法是色谱分析法的主流。到了20世纪60年代后期，将已经发展得比较成熟的气相色谱的理论与技术应用到液相色谱上来，使液相色谱得到了迅速的发展。特别是填料制备技术、检测技术和高压输液泵性能的不断改进，使液相色谱分析实现了高效化和高速化。具有这些优良性能的液相色谱仪于1969年商品化。从此，这种分离效率高、分析速度快的液相色谱就被称为高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC），也称高压液相色谱法或高速液相色谱法。　　气相色谱只适合分析较易挥发、且化学性质稳定的有机化合物，而HPLC则适合于分析那些用气相色谱难以分析的物质，如挥发性差、极性强、具有生物活性、热稳定性差的物质。现在，HPLC的应用范围已经远远超过气相色谱，位居色谱法之首。 　　高效液相色谱的类型　　广义地讲，固定相为平面状的纸色谱法和薄层色谱法也是以液体为流动相，也应归于液相色谱法。不过通常所说的液相色谱法仅指所用固定相为柱型的柱液相色谱法。　　通常将液相色谱法按分离机理分成吸附色谱法、分配色谱法、离子色谱法和凝胶色谱法四大类。其实，有些液相色谱方法并不能简单地归于这四类。按分离机理，有的相同或部分重叠。但这些方法或是在应用对象上有独特之处，或是在分离过程上有所不同，通常被赋予了比较固定的名称。　　现在的液相色谱仪一般都做成一个个单元组件，然后根据分析要求将各所需单元组件组合起来。最基本的组件是高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器和数据系统（记录仪、积分仪或色谱工作站）。此外，还可根据需要配置流动相在线脱气装置、梯度洗脱装置、自动进样系统、柱后反应系统和全自动控制系统等。　　液相色谱仪的工作过程：输液泵将流动相以稳定的流速（或压力）输送至分析体系，在色谱柱之前通过进样器将样品导入,流动相将样品带入色谱柱,在色谱柱中各组分因在固定相中的分配系数或吸附力大小的不同而被分离，并依次随流动相流至检测器，检测到的信号送至数据系统记录、处理或保存。二、梯度洗脱（gradient elution）又称为梯度淋洗或程序洗脱。在同一个分析周期中，按一定程度不断改变流动相的浓度配比，称为梯度洗脱。　　梯度洗脱（gradient elution）又称为梯度淋洗或程序洗脱。 　　在气相色谱中，为了改善对宽沸程样品的分离和缩短分析周期，广泛采用程序升温的方法。而在液相色谱中则采用梯度洗脱的方法。在同一个分析周期中，按一定程度不断改变流动相的浓度配比，称为梯度洗脱。从而可以使一个复杂样品中的性质差异较大的组分能按各自适宜的容量因子k达到良好的分离目的。 　　梯度洗脱的优点：1.缩短分析周期；2.提高分离能力；3.峰型得到改善，很少拖尾；4.增加灵敏度。但有时引起基线漂移。 　　梯度洗脱的原理： 　　流动相由几种不同极性的溶剂组成，通过改变流动相中各溶剂组成的比例改变流动相的极性，使每个流出的组分都有合适的容量因子k，并使样品种的所有组分可在最短时间内实现最佳分离。 　　梯度洗脱特点： 　　提高柱效，改善检测器的灵敏度。当样品中的一个峰的k值和最后一个峰的k值相差几十倍至几百倍时，使用梯度洗脱效果特别好。梯度洗脱中为保证流速的稳定，必须使用恒流泵，否则难获重复结果。梯度洗脱常用一个弱极性的溶剂A和一个强极性的溶剂B。 梯度洗脱装置示意图2 梯度洗脱示意图1（梯度洗脱参考：http://baike.baidu.com/view/1311799.htm）如图（两个图一种原理，前者为洗脱装置和柱子之间封闭，适用于配备压力泵的色谱柱，后者为洗脱装置和柱子之间隔离开来，是梯度洗脱的简易装置。）：两个容器放于同一水平上，两容器连通，B与柱相连，当溶液由B流入柱时，A中的溶液就会自动来补充，经搅拌与第一容器的溶液相混合，这样流入柱中的缓冲液的洗脱能力即成梯度变化。 　　洗脱时应满足以下要求：①洗脱液体积应足够大，一般要几十倍于床体积，从而使分离的各峰不致于太拥挤。②梯度的上限要足够高，使紧密吸附的物质能被洗脱下来。③梯度不要上升太快，要恰好使移动的区带在快到柱末端时达到解吸状态。目的物的过早解吸，会引起区带扩散；而目的物的过晚解吸会使峰形过宽。 　　梯度洗脱可分为低压梯度(又称为外梯度)和高压梯度(又称为内梯度)。 　　(1)低压梯度装置。低压梯度是采用比例调节阀，在常压下预先按一定的程序将溶剂混 　　合后，再用泵输入色谱柱系统，也称为泵前混合。 　　(2)高压梯度装置。由两台(或多台)高压输液泵、梯度程序控制器(或计算机及接口板控 　　制)、混合器等部件所组成。两台(或多台)泵分别将两种(或多种)极性不同的溶剂输入混合 　　器，经充分混合后进入色谱柱系统。

高效液相色谱使用步骤

1)、过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。

2)、对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。

3)、打开HPLC工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。

4)、进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。

5)、有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10ml/min。

6)、调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。

7)、设计走样方法。点击file，选取selectusersandmethods，可以选取现有的各种走样方法。若需建立一个新的方法，点击newmethod。选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。选完后，点击protocol。一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading-inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。

8)、进样和进样后操作。选定走样方法，点击start。进样，所有的样品均需过滤。方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。

9)、关机时，先关计算机，再关液相色谱。

10)、填写登记本，由负责人签字。

注意事项：

1)、流动相均需色谱纯度，水用20M的去离子水。脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。

2)、柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。

3)、所有过柱子的液体均需严格的过滤。

4)、压力不能太大，最好不要超过2000psi。